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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction,PCR）是分子生物學(xué)中基礎(chǔ)且廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一，用于特異性擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段。盡管PCR儀和試劑是核心要素，但實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行同樣高度依賴一系列專用耗材。這些pcr耗材不僅影響反應(yīng)效率和特異性，還直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性...
檢測(cè)試劑和目標(biāo)蛋白質(zhì)元件之間的非特異性蛋白質(zhì)相互作用可能會(huì)導(dǎo)致不需要的背景染色。為了最大限度地減少這種類型的相互作用，請(qǐng)使用適當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)封閉試劑：正常血清—廣泛用作組織和細(xì)胞染色中的通用蛋白塊。為了獲得最佳結(jié)果，請(qǐng)選擇與二抗種類相匹配的用于封閉的血清種類。無碳封閉液(SP-5040)–用于凝集素染色或用于多重IHC應(yīng)用。凝集素用于至少一種標(biāo)記，因?yàn)樵撊芤翰缓蓴_糖蛋白。BSA(SP-5050)—我們的BSA不含其他等級(jí)BSA中存在的糖蛋白和雜質(zhì)，并且可能會(huì)引入偽影或增加背景染...
一、鄰位連接適用的最短和最長距離是多少？所有的Duolink®PLA產(chǎn)品都是被設(shè)計(jì)用于鄰位檢測(cè)的。當(dāng)使用二抗方法時(shí)，理論上在兩種靶標(biāo)蛋白（表位）間產(chǎn)生信號(hào)的最長距離為40nm。這些數(shù)據(jù)是基于抗體的平均直徑約為10nm而計(jì)算出來的。Duolink®PLA理論上可檢測(cè)距離在0nm之內(nèi)的兩個(gè)表位，只要兩種單抗可發(fā)生結(jié)合并且不存在位阻。二、Duolink®PLA產(chǎn)品或試劑可持續(xù)多久？1.檢測(cè)試劑盒中的所有試劑必須總是被保存在-20°C。這一點(diǎn)對(duì)于連接酶和聚合酶...
建議及技巧：用于蛋白檢測(cè)的Duolink®PLA技術(shù)可提供一種具有一系列明確定義步驟的簡易而直接的實(shí)驗(yàn)方法。該章節(jié)將會(huì)對(duì)可確保Duolink®PLA實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的一些重要注意事項(xiàng)進(jìn)行描述。一、前期考慮：1.采用在待測(cè)樣品內(nèi)可具有最佳一抗性能的條件。這些條件包括樣品處理參數(shù)（固定、通透化、抗原修復(fù)等）、一抗效價(jià)以及孵育時(shí)間。2.為了可對(duì)結(jié)果進(jìn)行正確的評(píng)估，在實(shí)驗(yàn)中總是需要設(shè)置技術(shù)及可用的生物學(xué)對(duì)照。3.Duolink®PLAControlKit是一款可對(duì)...
Duolink®PLA結(jié)果為蛋白質(zhì)事件（表達(dá)、相互作用或修飾）提供了相對(duì)定量。因此，加入技術(shù)對(duì)照組，以及在可能的情況下加入生物對(duì)照組，是十分重要的。技術(shù)對(duì)照：每個(gè)Duolink®PLA實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該包含兩個(gè)技術(shù)對(duì)照組。這包括：1.分別省略一種一抗用于檢測(cè)每種一抗的非特異性結(jié)合有助于確定最佳一抗效價(jià)2.省略所有一抗用于檢測(cè)系統(tǒng)中Duolink®PLA探針的非特異性結(jié)合生物對(duì)照：除了技術(shù)對(duì)照外，強(qiáng)烈建議使用生物對(duì)照。陽性和陰性生物對(duì)照均可提供有價(jià)值的信息。1....
一、樣品選擇對(duì)樣品和蛋白質(zhì)靶標(biāo)的已有了解十分重要。選擇具有已知靶蛋白表達(dá)的系統(tǒng)將顯著增加Duolink®PLA實(shí)驗(yàn)成功的幾率。Duolink®PLA實(shí)驗(yàn)所需的樣本與用于傳統(tǒng)免疫熒光(IF)、免疫組織化學(xué)(IHC)或流式細(xì)胞術(shù)的樣本相同。因此，Duolink®PLA試劑適用多種樣品類型，包括：1.貼壁細(xì)胞2.懸浮細(xì)胞3.血細(xì)胞4.細(xì)胞離心涂片制劑5.石蠟包埋細(xì)胞樣品6.石蠟包埋組織切片7.冰凍組織切片8.新鮮組織切片在進(jìn)行Duolink®PLA實(shí)...
要成功地執(zhí)行Duolink®PLA實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)方案中有一些必要的考慮因素需要正確地準(zhǔn)備、設(shè)置和執(zhí)行。Duolink®PLA產(chǎn)品可用于熒光和明場(chǎng)。熒光Duolink®PLA試劑可用于顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用。一、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要設(shè)計(jì)一個(gè)成功的Duolink®PLA實(shí)驗(yàn)，必須考慮很多因素。這些因素包括但不限于：1.確定蛋白質(zhì)靶標(biāo)和實(shí)驗(yàn)類型2.選擇樣品（細(xì)胞或組織）3.設(shè)計(jì)您的讀出方案4.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)對(duì)照（技術(shù)和生物）靶標(biāo)識(shí)別：首先要確定的是目標(biāo)蛋白靶標(biāo)。是單一蛋...
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