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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction,PCR）是分子生物學(xué)中基礎(chǔ)且廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一，用于特異性擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段。盡管PCR儀和試劑是核心要素，但實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行同樣高度依賴一系列專用耗材。這些pcr耗材不僅影響反應(yīng)效率和特異性，還直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性...
對于細(xì)胞學(xué)染色，您實(shí)際上是在三種蘇木精染色之一之間進(jìn)行選擇：Gill1X蘇木精、Gill2X蘇木精和Harris蘇木精，酸化。以下是您如何為細(xì)胞學(xué)染色選擇最佳蘇木精，以及實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員選擇的兩種最常見染色的方案。識別細(xì)胞學(xué)標(biāo)本中的癌細(xì)胞、感染、炎癥或其他細(xì)胞異常一般來說，漸進(jìn)式吉爾蘇木精適合評估細(xì)胞學(xué)標(biāo)本。最常見的是，我們推薦Gill1X，因?yàn)樗徽J(rèn)為是Gill蘇木精染色劑中最淺的染色劑。它可以補(bǔ)充OG和EA染色，而不會(huì)過度染色標(biāo)本。有時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)Gill2X蘇木精（例如當(dāng)您...
分子克隆是分子生物學(xué)中用于組裝重組DNA分子的一組實(shí)驗(yàn)方法?；谫|(zhì)粒的克隆包括4個(gè)主要步驟：插入DNA制備載體DNA制備插入片段與載體的連接轉(zhuǎn)化為感受態(tài)細(xì)胞在下面的示例中，我們將描述如何使用SgfI和MluI將目標(biāo)插入片段亞克隆到載體中。插入DNA制備對含有插入片段的載體進(jìn)行限制性消化用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶消化含有插入片段的載體DNA。對于我們的示例，使用的限制性位點(diǎn)是SgfI和MluI位點(diǎn)。OriGene擁有全基因組cDNA表達(dá)載體。在瓊脂糖凝膠上運(yùn)行消化的插入DNA以檢查大...
蛋白質(zhì)印跡是研究實(shí)驗(yàn)室普遍使用的一種技術(shù)，用于研究感興趣的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)印跡用于抗體驗(yàn)證、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究以及許多其他應(yīng)用。1然而，生成可解釋的蛋白質(zhì)印跡結(jié)果可能具有挑戰(zhàn)性。以下是一些常見問題以及解決方法。高背景可能是由于嘗試這個(gè)高抗體濃度使用一抗和二抗進(jìn)行滴定。包括已知的蛋白質(zhì)對照。封閉液使用新鮮的封閉液，增加封閉時(shí)間/溫度，嘗試不同的封閉劑。印跡在封閉/洗滌過程中干燥確保膜在封閉和清洗步驟中被充分覆蓋。洗得不夠增加洗滌次數(shù)和洗滌液體積。確保至少洗滌3次，每次5分...
GreenqPCRMastermixHighROX針對塊循環(huán)儀中的qPCR（實(shí)時(shí)）PCR進(jìn)行了優(yōu)化，特別是來自AppliedBiosystems設(shè)備。含有500nMROX的GreenqPCR主混合物包含嵌入熒光染料和執(zhí)行定量PCR所需的最佳量的所有必需成分。GenaxxonGreenMasterMix中使用的化學(xué)修飾SuperHotTaq聚合酶的優(yōu)點(diǎn)：用于室溫設(shè)置的熱啟動(dòng)技術(shù)無需在冰上移液無需立即進(jìn)一步處理(PCR)。移液的PCR混合物可在室溫下保存最多3天。還可以擴(kuò)增富含G...
轉(zhuǎn)染是通過非病毒方式將任何核酸分子引入培養(yǎng)的真核細(xì)胞中。過去，它通常僅用于指代DNA，但隨著RNAi和最近CRISPR等應(yīng)用的開發(fā)，這種情況發(fā)生了變化。盡管將基因傳遞到細(xì)胞的方法有很多，但目前研究人員使用三種高度認(rèn)可的方法：化學(xué)試劑、電穿孔（基因電轉(zhuǎn)移）和病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)。最終目標(biāo)是將核酸輸送到細(xì)胞中，通過外源基因的表達(dá)或內(nèi)源基因的敲低來研究基因功能?；虮磉_(dá)操控是藥物開發(fā)、癌癥研究、基因治療和組織工程等研究領(lǐng)域的核心技術(shù)。真核細(xì)胞的化學(xué)轉(zhuǎn)染試劑與核酸結(jié)合形成帶正電荷的復(fù)合物。2)將...
弱染色或無染色來源解決方案脫蠟不充分延長切片脫蠟時(shí)間或更換新鮮二甲苯無活性的一抗更換新一批抗體由于儲(chǔ)存不當(dāng)，抗體無法發(fā)揮作用將抗體分裝成較小的體積并儲(chǔ)存在冰箱中（-20至-70°C），并避免重復(fù)凍融循環(huán)?；蚋鶕?jù)制造商的說明儲(chǔ)存抗體。抗體濃度太低增加一抗和/或二抗的濃度?；蛘哌\(yùn)行連續(xù)稀釋測試以確定提供最佳信噪比的最佳稀釋度抗體孵育時(shí)間不足增加抗體孵育時(shí)間組織固定不充分或不正確增加后固定時(shí)間或嘗試不同的固定劑組織過度固定減少后固定的持續(xù)時(shí)間。如果組織已經(jīng)過度固定，請執(zhí)行適當(dāng)或推薦...
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