品牌 其他品牌 貨號 FP-320 供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥
jenabioscience:生物素蛋白標(biāo)記試劑盒 ——蛋白質(zhì)生物素化試劑盒Jena Bioscience由Max-Planck-Institute of Molecular Physiology(Dortmund)的一組科學(xué)家于1998年成立，利用超過25年的學(xué)術(shù)知識為100多個國家的研究和行業(yè)客戶開發(fā)創(chuàng)新試劑。
供一般實(shí)驗(yàn)室使用。
運(yùn)輸: 凝膠包裝運(yùn)輸
儲存條件: 儲存在-20°C 避免冷凍/解凍循環(huán)
保質(zhì)期: 12個月
描述: 親和素、鏈霉親和素或NeutrAvidin與生物素的結(jié)合是已知*強(qiáng) -15 米（meter的縮寫）） 維生素生物素可以與許多蛋白質(zhì)結(jié)合，而不會因生物素分子的小尺寸而喪失其生物活性。生物素化探針通常由抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素蛋白或NeutrAvidin檢測，攜帶報告基團(tuán)，例如辣根過氧化物酶(HRP)或熒光標(biāo)記。 感興趣的蛋白質(zhì)(POI)通常在不同的位置被生物素化。每個結(jié)合的生物素結(jié)合一個抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素蛋白或NeutrAvidin分子，導(dǎo)致信號放大。 生物素和生物素結(jié)合蛋白之間的相互作用用于各種應(yīng)用，如親和層析、熒光激活細(xì)胞分選(FACS)、ELISA和蛋白質(zhì)印跡。 該蛋白質(zhì)生物素化試劑盒包含對5毫克POI進(jìn)行5次單獨(dú)標(biāo)記反應(yīng)所需的所有試劑。
內(nèi)容: 5瓶，每瓶含1毫克
二甲基甲酰胺 500微升
碳酸氫鈉 1瓶含168毫克
超純水 2毫升
儲存和穩(wěn)定性: 收到后，將生物素儲存在-20°c下。其他成分可儲存在室溫下。如果按照建議儲存，Jena Bioscience保證該產(chǎn)品在12個月內(nèi)保持最佳性能。
協(xié)議: 蛋白質(zhì)濃度應(yīng)該至少為2 mg/ml，更高的濃度-高達(dá)10 mg/ml -是優(yōu)選的，因?yàn)榈蜐舛葧绊憳?biāo)記效率。我們建議每個標(biāo)記反應(yīng)使用大約5毫克蛋白質(zhì)。 含有伯胺如Tris和甘氨酸的緩沖液不適用于標(biāo)記反應(yīng)，必須在開始標(biāo)記反應(yīng)前用合適的不含胺的緩沖液如PBS、MES或HEPES替換。 實(shí)驗(yàn)協(xié)議
加入2 ml超純水溶解碳酸氫鈉。得到的1 M溶液在4°C下至少穩(wěn)定2周。 向蛋白質(zhì)溶液中加入適量的碳酸氫鈉(1 M ),使最終濃度達(dá)到100 mM 從冰箱中取出一個生物素小瓶，并在打開前將其平衡至室溫。通過添加100 μl DMF制備生物素，使?jié)舛冗_(dá)到10 mg/ml。渦旋直至生物素*全 將500 μl蛋白質(zhì)溶液(10 mg/ml)和溶解的生物素加入適當(dāng)?shù)男∑恐?。小心渦旋并短暫離心，收集試管底部的反應(yīng)混合物。 室溫下在搖床中培養(yǎng)一小時。 使用標(biāo)準(zhǔn)凝膠過濾柱如Sephadex G-25或類似物純化綴合物。或者，游離生物素可以通過透析或適當(dāng)?shù)男D(zhuǎn)濃縮器從綴合物中分離出來。 請注意，該套件不提供蛋白質(zhì)純化材料！
用SDS-PAGE分析你的結(jié)合物。 結(jié)合物的儲存 像未標(biāo)記的蛋白質(zhì)一樣儲存結(jié)合物。我們建議將溶液分成小份，并在-20°C或-80°C下冷凍。避免反復(fù)冷凍和解凍！
故障排除:
蛋白質(zhì)溶液的濃度
該分析被優(yōu)化用于標(biāo)記濃度為10 mg/ml的5 mg蛋白質(zhì)。
生物素化的效率強(qiáng)烈依賴于濃度，并且在不同的蛋白質(zhì)之間有所不同。因此，在每一種情況下，優(yōu)化可能是獲得最佳生物素化所必需的。 緩沖成分
含有伯胺(甚至微量)的蛋白質(zhì)溶液會顯著降低生物素化效率。確保你的蛋白質(zhì)被充分透析，以防它與含胺物質(zhì)接觸。 pH值的影響
檢查你的蛋白質(zhì)溶液的pH值！參考范圍是8.2 - 8.5。
蛋白質(zhì)的伯氨基不能被質(zhì)子化而具有活性，因此，蛋白質(zhì)溶液的pH值必須足夠高。另一方面，NHS酯的水解速率隨著溶液pH值的增加而增加，從而產(chǎn)生非反應(yīng)性生物素。最佳生物素化結(jié)果已在pH 8.3獲得。
在pH值較低的強(qiáng)緩沖蛋白質(zhì)溶液中，100 mM碳酸氫鈉可能不足以將pH值提高到最佳值。您可以添加更多的碳酸氫鈉，直到達(dá)到最佳pH值。 請注意，生物素化效率不僅取決于環(huán)境條件，還取決于蛋白質(zhì)特性。蛋白質(zhì)表面的三級結(jié)構(gòu)和由此產(chǎn)生的賴氨酸數(shù)量以及等電點(diǎn)和蛋白質(zhì)在pH 8.3下的行為起作用。
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