除嗜堿性粒細(xì)胞外，多形核白細(xì)胞(PMN)的漂浮密度比單核細(xì)胞大得多，大于1.085 g/ml。不幸的是，紅細(xì)胞的漂浮密度往往為1.09 - 1.11 g/ml，這使得使用類(lèi)似于單核細(xì)胞的密度屏障從全血中分離更加困難。為了克服這些困難，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了許多程序。

多晶型制劑的高滲透壓銩導(dǎo)致紅細(xì)胞失水和收縮，從而增加其有效浮力密度。這使得葡聚糖聚集的紅細(xì)胞通過(guò)致密介質(zhì)快速沉淀。

因?yàn)殡S著細(xì)胞進(jìn)一步沉淀到介質(zhì)中，介質(zhì)和紅細(xì)胞之間的滲透梯度下降(即紅細(xì)胞的失水在多晶型物的頂部最大并且隨著它們進(jìn)一步沉淀而逐漸減少)，在密度屏障內(nèi)形成泛影葡胺的梯度。PMNs在該密度梯度內(nèi)形成條帶，而單核細(xì)胞留在樣品/培養(yǎng)基界面。

使用特定的LAL試驗(yàn)檢查每批多晶型制劑的內(nèi)毒素水平。我們的目標(biāo)是生產(chǎn)內(nèi)毒素水平低于或等于0.13 IU/ml的批次。

該方法僅對(duì)未稀釋的全血有效，對(duì)富含白細(xì)胞的部分無(wú)效。溫度對(duì)于獲得最佳結(jié)果非常重要，因?yàn)闇囟鹊淖兓瘯?huì)影響多晶型物的密度和粘度解決方案。血樣和培養(yǎng)基的溫度應(yīng)保持在18-22攝氏度之間。

多晶型制備物頂部和底部條帶的分析銩可以通過(guò)Coulter STKR細(xì)胞分析儀進(jìn)行分離。分析儀將樣品中的細(xì)胞數(shù)量(縱坐標(biāo))確定為細(xì)胞體積(橫坐標(biāo))的函數(shù)。相對(duì)細(xì)胞數(shù)是特定體積的細(xì)胞數(shù)，表示為每個(gè)樣品中總細(xì)胞數(shù)的一部分。

多形制劑頂部的細(xì)胞帶僅包含外周血單核細(xì)胞(PBMCs)。細(xì)胞帶本身可分為淋巴細(xì)胞(上層，1)和單核細(xì)胞(下層，2)。所有PMN都在底部單元帶中，被多晶型制備溶液包圍。紅細(xì)胞對(duì)PMN帶的污染占細(xì)胞總數(shù)的2-6 %