Badrilla 開(kāi)發(fā)了一種用于免疫測(cè)定校準(zhǔn)的專有技術(shù)，可將常見(jiàn)的免疫測(cè)定平臺(tái)（蛋白質(zhì)印跡）升級(jí)為強(qiáng)大的定量平臺(tái)。定量免疫測(cè)定可用于有限數(shù)量的應(yīng)用（某些 ELISA 測(cè)定），但大多數(shù)免疫測(cè)定形式（蛋白質(zhì)印跡、免疫顯微鏡）中不存在定量免疫測(cè)定。研究人員希望盡可能以絕對(duì)化學(xué)單位準(zhǔn)確、可重復(fù)地測(cè)量生物標(biāo)志物。為了實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，Badrila 創(chuàng)建了一種專有的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，將蛋白質(zhì)印跡升級(jí)為定量免疫測(cè)定，能夠檢測(cè)絕對(duì)化學(xué)單位（pmol/樣本或類似單位）的生物標(biāo)志物濃度。這為快速開(kāi)發(fā)感興趣的生物標(biāo)志物的簡(jiǎn)單定量測(cè)定提供了一條途徑。

這項(xiàng)技術(shù)是如何運(yùn)作的？

高質(zhì)量校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品將特定免疫測(cè)定的表位特征整合到重組產(chǎn)品中，或者通過(guò)共價(jià)連接到支架上確定的反應(yīng)位點(diǎn)（本身是重組蛋白：b），或者通過(guò)制造為支架本身的延伸a）。這些制造方法允許根據(jù)需要摻入各種復(fù)雜的表位，從簡(jiǎn)單的肽和磷酸肽到蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域。

可以快速生成所研究的生物標(biāo)志物校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)。此類校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)可以以允許構(gòu)建校準(zhǔn)曲線的濃度范圍并入測(cè)定中。這可用于高精度地確定生物標(biāo)志物的絕對(duì)濃度。

在測(cè)試系統(tǒng)中，對(duì) His6 表位校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行了兩次蛋白質(zhì)印跡分析。觀察到 55kDa 的單條帶，信號(hào)強(qiáng)度隨校準(zhǔn)物上樣量的變化而變化 (4pmol – 0.125pmol)。

原始數(shù)據(jù)的密度測(cè)定允許構(gòu)建校準(zhǔn)曲線，該校準(zhǔn)曲線可以通過(guò)以高的精度一式三份檢查的三種校準(zhǔn)物濃度輕松定義。使用校準(zhǔn)曲線可以計(jì)算并行檢查的生物標(biāo)志物的濃度。觀察到的濃度和絕對(duì)濃度的變化小于 10%。

哪些生物標(biāo)志物可以校準(zhǔn)？

· 線性肽表位

· 翻譯后修飾位點(diǎn)（磷酸化、糖化等）

· 半抗原（染料、藥物、代謝物）

· 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域

· 單個(gè)或多個(gè)表位，以及

· 上述的組合

通過(guò)協(xié)作發(fā)展

Badrilla 與利茲大學(xué)、利物浦大學(xué)和牛津大學(xué)的杰出學(xué)術(shù)團(tuán)體合作開(kāi)展了一項(xiàng)研發(fā)計(jì)劃。我們富有成效的協(xié)作方法使我們能夠：

· 采用定量質(zhì)譜法的基準(zhǔn)定量蛋白質(zhì)印跡技術(shù)

· 將定量蛋白質(zhì)印跡與高通量蛋白質(zhì)印跡相結(jié)合，以實(shí)現(xiàn)更高的分析通量

· 探索新穎的制造技術(shù)（用于校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)）以擴(kuò)展該技術(shù)的多功能性。